陶祥副教授谈:一组大样本宫颈癌组织的HPV分型检测结果

作者: 单位: 来源:中国妇产科在线 编者:
2017-6-6 阅读

【编者按】目前,世界范围内,包括中国,普遍认可HPV检测在宫颈癌筛查中的应用价值,国际上也有主要的几种HPV检测方法被应用于筛查。我国食品药品监督管理总局已经批准了超过60种的HPV检测方法,但不同于欧美等国家,我国HPV检测方法大都缺乏基于人群的大规模多中心HPV检测宫颈癌筛查的临床研究,因此,对符合中国国情的HPV检测方法仍存在一些疑问,包括:高危HPV基因型在人种之间的差异?在中国,HPV检测覆盖多少基因型别比较合适?除HPV16/18分型外,是否需要增加中国人群的常见致病高危型HPV52/58等基因型别的分型?国外的HPV检测设置的临床阈值是否也适用于中国人群的检测?在第三次CSCCP会议的病理科分论坛上,复旦大学附属妇产科医院病理科陶祥副教授为大家带来了题为《一组大样本宫颈癌组织的HPV分型检测结果》的研究报告。对近1000例宫颈癌样本进行了HPV分型分析,部分样本同时对比分析了国内及国外HPV检测方法的检测结果。通过中国人群大量宫颈癌样本数据分析,对以上部分问题做了相关探讨和思考。中国妇产科在线根据讲课内容进行了整理,供大家学习参考。


现场讲座视频


宫颈癌组织的HPV分型检测

【专家简介】陶祥,复旦大学附属妇产科医院病理科主治医生。医学博士,从事病理诊断工作多年。目前从事妇产科专科病理诊断工作。
学习经历:
1997.09-2002.06 东南大学医学院临床医学专业本科
2002.09-2005.06 中山大学中山医学院病理生理学硕士
2008.09-2011.06 复旦大学医学院妇产科学博士
2014.10-2015.04 美国匹兹堡大学医学中心Magee妇产科医院病理科访问学者


背景介绍和研究目的:

1. 高危HPV宫颈癌的关系

众所周知,高危型人乳头瘤病毒(hrHPV)感染与宫颈癌的发生之间的关系非常密切,是绝大部分宫颈癌发病的原因,因此,临床上把hrHPV检测用于宫颈癌的筛查。

2. 高危HPV基因型在人种之间的差异

在世界范围内,hrHPV基因型别和比例在人种之间的分布存在差异,这就有必要研究一下在中国hrHPV型别,以用于HPV筛查的精准治疗。

3. HPV分型的必要性

HPV16/18阳性患者转诊阴道镜具有重大的临床意义,对16/18型分型非常有必要。但是,其他少见的高危型别或者非高危型别是否也需要检测出来呢?

4. HPV需要检测多少种型别合适

美国FDA认证的HPV分型是HPV16/18单独检测,其他12种高危型进行汇总报告。但在中国这样的HPV检测是否合适?在中国需要检测多少型HPV?大家都知道,HPV的型别种类繁多,目前还没有一个方法能一次把所有的HPV分型都检测出来。即使存在这样的方法,很大一部分HPV都属于非致癌的低危型HPV,检测出来也是劳民伤财,对宫颈癌的防控没有帮助。HPV筛查的精确治疗需要解答上述问题,因此我们需要得到一个高致病性HPV在中国人群中的分布情况。

5. 进口HPV检测方法的病毒阈值是否符合中国人群?

我院应用FDA认证的进口HPV检测方法进行检测,但进口的HPV检测方法是根据欧美人群进行的滴度设定,设定的病毒阈值是否符合中国人群?这点也是我们需要讨论的。

6. 研究背景

早些时候,我院联合金域检验公司在赵澄泉教授的指导下,进行了一项关于宫颈癌患者诊断前期HPV检测阴性率的研究,总的阴性率为15.5%。金域公司以HC2方法及荧光杂交流式法进行研究显示,阴性率为7.5%。进一步对这些HPV阴性的宫颈癌组织切片DNA利用罗氏linear array的分型方法进行检测,44.3%HPV阳性,其中有三例宫颈癌由HPV26型/73型导致,这两种HPV基因亚型属于中危型,不在cobas检测范围内。


预实验:

在进行试验前,对硕世21HPV分型定量检测方法(14种高危)与罗氏cobasHPV(14种高危)检测方法进行验证,一共200例标本,Kappa值0.9,一致性很好,证实硕世检测方法可信。 该方法的检测范围包括13种hrHPV:16,18,31,59,66,33,58,45,56,52,35,51,39;4种潜在致癌HPV:26,66,73,82;4种低危HPV:6,11,53,81。

病例筛选:

选择2015-8-1至2017-4-30,复旦大学附属妇产科医院(杨浦院区)连续收到的共计1000例广泛子宫切除的宫颈癌手术标本,剔除标本量少和没有肿瘤残留的标本,得到951例标本数据。提取石蜡组织中的DNA(Qiagen FFPE DNA Kit),分光光度计检测DNA浓度和纯度, 在951例患者中,78.1%是鳞状细胞癌(scc),13.2%是腺癌(ADC),大部分是普通型腺癌106例,腺鳞癌(ASC)7.3%。


研究结果:

1. 检测到的宫颈癌的基因型(总951例,包括叠加感染):HPV16、18型阳性患者高达80%以上,和国外报道相同,分别占第一位和第二位;中危型HPV少数阳性;仍然有3%高危型HPV阴性,2%所有HPV阴性。

2. 在HPV16、18阴性病例的HPV感染类型(共79例)中:HPV阴性所占比率最高,32例,其次是HPV58、31和中危型HPV26,低危型HPV81型2例。

3. 中危型HPV和高危型HPV感染相互独立:在HPV16/18型阴性的病例HPV感染类型分析中可以看到,去除掉高危型HPV之后,中危型HPV没有变化,说明中危型HPV感染和高危型HPV感染是相互独立的,检测中危型可以增加致癌型HPV的型别覆盖率。而低危型2例消失,说明单独的低危型HPV感染不会致癌。

4. HPV感染类型与组织学类型的关系显示:鳞癌743例,腺癌126例,腺鳞癌69例,HPV16阳性在鳞癌腺癌,腺鳞癌中占据绝大部分,HPV18阳性主要是腺癌,与国外报道一致。有报道HPV45阳性在腺癌中居第三位,但在我们的样本中,HPV45型并不多,而且低于鳞癌,还是可以看到以腺癌为主HPV阴性。

5. 去除HPV16、18型后的感染类型:鳞癌中最多见的为HPV58阳性,其次是阴性的,再次是HPV31阳性;腺癌中,大部分是HPV阴性;其他各型HPV阳性很少。

 

6. 单一型HPV感染与叠加感染研究显示:在鳞癌中,绝大部分是单一型HPV感染,在腺癌和腺鳞癌当中比例下降。

 

7. HPV基因型与年龄的关系:在为数不多的病例中我们可以看到,基因型与年龄的分布无明显差异,有一部分宫颈癌病例在手术前1年之内进行了罗氏Cobas4800检测,951例手术病例中108例可以查到HPV检测结果:HPV16阳性率64.8%,HPV18型11.1%,其他12型HPV为29.6%,总的阴性率为11.1%。宫颈癌诊断一年内的HPV数据与肿瘤种类之间的关系:鳞癌中HPV阳性率96.1%,腺癌中61.1%,腺鳞癌100%。


8. FDA认可的HPV检测没有设置合适中国人的阈值: 通过诊断前的HPV感染与组织的HPV相关性分析发现,罗氏检测的HPV16型阴性的病例组织中,硕世检测出50%以上病例HPV阳性(20例);罗氏检测HPV18型阴性的病例组织中,硕世检测出6例HPV阳性;在其他罗氏12型高危型阴性组织中,也检测到50%以上阳性。这就使人产生一种思考:临床上使用罗氏Cobas检测,出现了相当比例的HPV阴性的宫颈癌,经过证实有一部分为HPV阳性,说明针对中国人群,Cobas设置的HPV阈值偏高,特别是16型。另外存在的3.4%的真阴性病例是否与HPV无关?这也是不一定的,有一些HPV感染可能会出现HPV碎片化,导致没有办法检测出来。


结果讨论

研究中可以看到中危型HPV与高危型HPV基本没有叠加感染,检测中危型可补充高危型HPV覆盖不足问题,特别是26型,在本研究由26型导致的宫颈癌的发病率比较明显。而低危型除少数与高危型叠加感染,单独存在的低危型HPV病例并没有发现。除常见高危型以外,是否可以考虑中危型HPV检测的必要。FDA批准的进口产品在针对中国人群的HPV检测上,可能没有根据中国人群设置适合中国人群的临床阈值,在本研究中发现,在宫颈癌样本中,国产硕世产品检测出了一定比例进口产品没有检测出的HPV阳性病例。HPV16和18型感染占宫颈癌样本中所有HPV阳性型别的91.7%,是否已经达到饱和状态。未来如果需要更进一步提高宫颈癌检出效率,是否可以通过基因测序的方法检测片段化的HPV DNA整合的具体位置信息用以阐述发病机制。


报告声明:本研究与商业利益无关,感谢硕世生物科技提供了本研究相关的检测仪器和PCR试剂。

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